U14小鼠子宮頸癌細胞
種屬:小鼠
組織來源:宮頸癌
生長特性:懸浮生
形態特征:上皮樣;多角
*培養基:RPMI1640,90%;FBS,10%(均來自GIBCO 公司)。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2)長,5%
傳代方法:一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。
凍存方法/凍存液:95%*培養液,5%DMSO
儲存:液氮儲存
形態特征:上皮樣;多角
實驗要點及說明
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態*的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
U14小鼠子宮頸癌細胞
細胞處理方法:
一、貼壁細胞
1、 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規范,打開細胞培養瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養基,到50ml離心管中,剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代,如沒有達到添加6ml新鮮培養基繼續培養。
6、如果肉眼檢查上清有細胞,對50ml上清進行離心收集細胞,如果細胞連片狀態,棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養。
二、懸浮細胞
1、接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規范,打開細胞培養瓶。
4、細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養基,重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉入六孔板或者細胞培養瓶種,加入新鮮培養基,置于 37℃,5%CO2 培養(大部分細胞)。